Nanodrop是實驗室中常見的分光光度計。與傳統(tǒng)需要比色皿的分光光度計相比，Nanodrop所需樣品的體積大大減少，只需要2 μL，同時也大大降低了實驗準備以及清洗的時間。這些優(yōu)勢使得科研人員能夠在一分鐘內(nèi)檢測多個樣品。當然如果你有更多的樣品，還嫌效率不夠高，你可以選擇應用Nanodrop 8000系統(tǒng)，它能夠同時檢測8個樣品。
Nanodrop能夠在包括紫外及可見光區(qū)域在內(nèi)的光譜范圍內(nèi)檢測樣品的吸光度信號。在實驗開始前，需要在儀器的軟件內(nèi)設置檢測樣品的種類，包括蛋白質(zhì)，DNA, RNA等。根據(jù)吸光度,能夠計算樣品的濃度。DNA及RNA 在260 nm處有大吸收度，蛋白質(zhì)在280 nm處有大吸收峰值。濃度與吸光度的對應關系見下表。當然表中濃度與吸光度對應關系成立的前提是樣品必須具有很高的純度。樣品純度可以通過A260/280判定，其臨界值可參考下表。 大家可能注意到，RNA的A260/280比值要比DNA的值高一些，這是因為堿基U的A260/280的比值要比堿基T的A260/280比值更高。
吸光度 | 樣品 | 樣品濃度 | 高純度樣品標準（A260/280 ） |
A260 =1 | 雙鏈DNA | 50 μg/ml | <1.8 |
單鏈DNA | 33 μg/ml | ||
單鏈RNA | 40 μg/ml | >2.0 | |
A280 = 1 | 蛋白質(zhì) | 1 mg/ml | <0.6 |
對Nanodrop檢測結(jié)果產(chǎn)生直接影響的因素就是樣品的純度。A260/280是檢測樣品純度的一個指標，但這個參數(shù)只衡量了蛋白質(zhì)與核酸之間相互污染的情況。沒有考慮DNA與RNA之間彼此污染以及其他物質(zhì)污染的情況，比如苯酚在270 nm附近具有較大的吸光值。
因此在利用Nanodrop檢測核酸濃度的時候，除了A260/280外，A260/230也是檢測樣品純度的一個指標，高純度DNA和RNA的兩個臨界值同樣是1.8以及2.0。A260/230在2.0-2.2之間是合理的數(shù)值。對于純的核酸，A260/230的值通常大于A260/280的值。核酸提取過程中殘留的有機物通常會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。如果檢測結(jié)果顯示230nm處具有很大的吸光值，樣品很有可能被EDTA，碳水化合物或者硫氰酸胍等物質(zhì)污染了。
Nanodrop的檢測范圍。對于核酸來說，Nanodrop的檢測濃度范圍在2ng-15μg/μL之間。所以當樣品的濃度很低時，比如從單個或少量細胞中提取的DNA或RNA，利用Nanodrop來測量濃度可能就不適合了。這時需要考慮其他的核酸定量方法比如熒光染料的方法。
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